[NGS]次世代定序(Next Generation Sequencing, NGS)

       

如果說生物晶片 (microarray) 是目前基因高通量分析 (high-throughput analysis) 的技術代表，從2012開始次世代定序 (Next Generation Sequencing, NGS)技術已成為另一個高通量技術的新星。 

NGS 為基於 massively parallel sequencing 概念而達到高通量的技術，利用同時間大量的定序反應，達到高速、高通量的特性，目前 NGS 定序產量可比傳統 Sanger 定序快20萬倍以上 (~600 Gbp vs 3 Mbp)。對比人類基因體計畫花 10 年定出一個 genome，NGS 技術 1 天就可以定出 10x coverage 以上的全基因體序列，因此能做到傳統 Sanger 定序儀無法提供的分析，像是全基因體定序 (Whole genome sequencing)、新基因定序 (De-Novo sequencing) 或是利用轉錄組定序 (Transcriptome sequencing) 進行 mRNA、miRNA 表現量分析及RNA splicing 研究等。 

現階段 NGS 定序仍是以二代定序為主流，主要包含 Solexa、SOLiD 及 454 三種平台。這三種平台的原理有些許差異，但皆是依照基本三大步驟來進行實驗，包含(1)Library Construction:建庫 (2)Sequencing:定序 (3)Analysis:分析；隨著實驗設計與應用的不同，適用的定序方式、定序量、分析類型與平台選擇也有所不同，對於進行高通量實驗前必須多方評估預算與規格是否符合實驗設計的需求，以避免不必要的花費或者選擇較低價規格而導致無法獲得最初觀察的實驗目標。

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