[試劑耗材]PCR實驗心法 : 遞減PCR (Touchdown PCR) - 排除非專一產物的小技巧

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說到聚合酶連鎖反應(Polymerase Chain Reaction, PCR)技術


在分子生物學中就像吃飯睡覺一樣普遍


雖說原理和操作很簡單 但有時做起來卻又不容易成功


 


Tm值和primer的設計 以及樣本本身的品質


往往會影響到後續實驗的結果


 


然而在某些情況之下 即使注意到上訴所說的條件


因為目標序列和其他非目標序列太過相近


常常會有不專一的PCR產物產生


 


為了降低非專一產物來提高實驗Tm值


卻又不想因過高的Tm值造成產物量降低


所以發展出一種PCR技術 稱為 遞減PCR (Touchdown PCR)


 


遞減PCR (Touchdown PCR)


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藍色 ->  目標序列  黑色 -> 非目標序列(其他雜質)


1. 先設定一組比較高的Tm值來提高目標的專一性結合


   經過幾個cycle的目標物放大 提高目標物在PCR反應中所佔比例


2. 在PCR後續cycle逐步降低Tm值 一直達到最適合的較低Tm值


3. 在此較低的Tm值進行目標產物的大量增幅


 


雖然此遞減PCR (Touchdown PCR)方法不是萬靈丹


但在某些非專一產物多或者目標物比例很少的實驗下


不仿也可以試試這種實驗方法 !


ps. 進行實驗時記得要找可以適用touchdown PCR的PCR儀器


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