說到聚合酶連鎖反應(Polymerase Chain Reaction, PCR)技術
在分子生物學中就像吃飯睡覺一樣普遍
雖說原理和操作很簡單 但有時做起來卻又不容易成功
Tm值和primer的設計 以及樣本本身的品質
往往會影響到後續實驗的結果
然而在某些情況之下 即使注意到上訴所說的條件
因為目標序列和其他非目標序列太過相近
常常會有不專一的PCR產物產生
為了降低非專一產物來提高實驗Tm值
卻又不想因過高的Tm值造成產物量降低
所以發展出一種PCR技術 稱為 遞減PCR (Touchdown PCR)
遞減PCR (Touchdown PCR)
藍色 -> 目標序列 黑色 -> 非目標序列(其他雜質)
1. 先設定一組比較高的Tm值來提高目標的專一性結合
經過幾個cycle的目標物放大 提高目標物在PCR反應中所佔比例
2. 在PCR後續cycle逐步降低Tm值 一直達到最適合的較低Tm值
3. 在此較低的Tm值進行目標產物的大量增幅
雖然此遞減PCR (Touchdown PCR)方法不是萬靈丹
但在某些非專一產物多或者目標物比例很少的實驗下
不仿也可以試試這種實驗方法 !
ps. 進行實驗時記得要找可以適用touchdown PCR的PCR儀器
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