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二級抗體選擇指南 - 二抗選得好實驗難不倒 !

張貼者： welgene 日期： 5月 11, 2017

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昨日的棄土明日的寶山 - 認識胞外體 Exosome 開啟研究新領域

張貼者： welgene 日期： 5月 04, 2017

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二級抗體選擇指南 - 二抗選得好實驗難不倒 !

二級抗體能結合至一級抗體，常用於檢測和純化目標蛋白的分析中，如 ELISA、免疫螢光法 (IF, Immunofluorescence)、西方墨點法 (WB, Western Blot)。二級抗體還可與其它像是螢光染劑或酵素等的小分子結合，使得它們更容易被檢測。使用二次抗體能減少一級抗體額外嵌合分子標記的需求，使得一級抗體能更有效地辨識目標抗原。此外，一級抗體能與嵌合不同分子標記的同種二級抗體作結合，讓檢測更為彈性與強大。EpiGentek 的高品質二級抗體適用各種實驗應用，此外也有多樣的分子標定嵌合種類與抗體類型可供選擇，但在眾多的二級抗體中如何選擇最適合的呢? 只要把握以下要點就不用擔心： 1. 宿主：宿主是製造抗體的來源物種。二級抗體的生產來源必定是不同於一級抗體的物種來源，由此來增加二級抗體對於一級抗體的辨識特異性。例如一級抗體來自於小鼠 (mouse) 時，二級抗體就必須是抗小鼠 (anti-mouse) 的，或者是原本不會在小鼠中出現的抗體。 2. 檢測方法：選擇最佳二級抗體另一個重要因素是分析方法。如果目標分析方法是 WB、IP 或者 ELISA，理想的二級抗體是與酵素嵌合的。如果是 IF 或流式細胞儀 (FC, Flow Cytometry) 的實驗，嵌合螢光染劑的二級抗體則是最好的選擇。若是要偵測低表現量的蛋白質，推薦可以選擇嵌合生物素 (biotinylated) 的二級抗體。 3. 純化方式：抗體的純化經由將其通過具有固定化配體樹脂 (immobilized ligand resin) 的管柱。配體和抗體相互結合後，血清經由清洗步驟並加入試劑來分離配體與抗體的結合作用，進而產生純化的抗體。這類型的純化是以目標抗原 (抗體辨識配體) 或親和性配體 (配體辨識抗體) 的方式進行。目標抗原方式只適合用於純化特定抗原專一性的二級抗體，一般最常用純化二級抗體的方式則是親和性配體方法。親和性純化的抗體可以增加其專一性、降低背景值並提高敏感性。經過純化的抗體能有效減少其差異性，使其獲得更佳的實驗重複性。 4. 交叉吸附 (Cross-adsorption)：交叉吸附步驟是一種提高二級抗體專一性的方式，將二級抗體經過含不同物種抗體的固定式基質管住，讓這些二級抗體辨識這些外來抗體，並經過辨識結合、沖洗等步驟，這個過程可

[試劑耗材]基本分生技術介紹 PCR Cloning - 分生實驗的必經之路

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