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HMW-DNA 與三代定序的全新應用

張貼者： welgene 日期： 2月 02, 2021

三代定序-long read 生技新知 HMW-DNA應用 Nanopore Pacific BioScience

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二級抗體選擇指南 - 二抗選得好實驗難不倒 !

二級抗體能結合至一級抗體，常用於檢測和純化目標蛋白的分析中，如 ELISA、免疫螢光法 (IF, Immunofluorescence)、西方墨點法 (WB, Western Blot)。二級抗體還可與其它像是螢光染劑或酵素等的小分子結合，使得它們更容易被檢測。使用二次抗體能減少一級抗體額外嵌合分子標記的需求，使得一級抗體能更有效地辨識目標抗原。此外，一級抗體能與嵌合不同分子標記的同種二級抗體作結合，讓檢測更為彈性與強大。EpiGentek 的高品質二級抗體適用各種實驗應用，此外也有多樣的分子標定嵌合種類與抗體類型可供選擇，但在眾多的二級抗體中如何選擇最適合的呢? 只要把握以下要點就不用擔心： 1. 宿主：宿主是製造抗體的來源物種。二級抗體的生產來源必定是不同於一級抗體的物種來源，由此來增加二級抗體對於一級抗體的辨識特異性。例如一級抗體來自於小鼠 (mouse) 時，二級抗體就必須是抗小鼠 (anti-mouse) 的，或者是原本不會在小鼠中出現的抗體。 2. 檢測方法：選擇最佳二級抗體另一個重要因素是分析方法。如果目標分析方法是 WB、IP 或者 ELISA，理想的二級抗體是與酵素嵌合的。如果是 IF 或流式細胞儀 (FC, Flow Cytometry) 的實驗，嵌合螢光染劑的二級抗體則是最好的選擇。若是要偵測低表現量的蛋白質，推薦可以選擇嵌合生物素 (biotinylated) 的二級抗體。 3. 純化方式：抗體的純化經由將其通過具有固定化配體樹脂 (immobilized ligand resin) 的管柱。配體和抗體相互結合後，血清經由清洗步驟並加入試劑來分離配體與抗體的結合作用，進而產生純化的抗體。這類型的純化是以目標抗原 (抗體辨識配體) 或親和性配體 (配體辨識抗體) 的方式進行。目標抗原方式只適合用於純化特定抗原專一性的二級抗體，一般最常用純化二級抗體的方式則是親和性配體方法。親和性純化的抗體可以增加其專一性、降低背景值並提高敏感性。經過純化的抗體能有效減少其差異性，使其獲得更佳的實驗重複性。 4. 交叉吸附 (Cross-adsorption)：交叉吸附步驟是一種提高二級抗體專一性的方式，將二級抗體經過含不同物種抗體的固定式基質管住，讓這些二級抗體辨識這些外來抗體，並經過辨識結合、沖洗等步驟，這個過程可

昨日的棄土明日的寶山 - 認識胞外體 Exosome 開啟研究新領域

胞外體 (外泌體, exosome) 是存在於真核生物中，用於包覆物質並釋放至細胞外的特殊小囊泡。這些小囊泡平均大小落在 30-100 nm 之間，在不同狀態、不同微環境產生的外泌體亦有不同的組成。我們可以把這些細胞釋放出來的小囊泡，想像成生物體當中的快遞收送人員，蒐集許多的貨物並運送 (擴散) 至指定的鄰近細胞或其他位置，進而來控制生物表現。其實在生物體中，細胞間的溝通有許多種方式，例如透過內分泌系統的激素來調節生長發育、或是透過免疫反應輸送抗體來防禦抵抗外來病原，但本次所分享的外泌體更為直接，能夠藉由包裹的蛋白質、microRNA、mRNA 等來有效率地控制細胞基因表現和蛋白質功能的表達。最早在 1980 年，就有醫學研究發現在癌症病人身上有特殊的包裹囊泡，將專屬癌症組織的抗體 (antibody) 由媽媽傳遞給新生兒而造成細胞表現異常 1 ，然而對比其他胎盤組織的細胞卻沒有直接產生變異。有了這個前例，醫學研究開始發現有許多過去認定細胞變異造成的異常，其實是由於這個小型的細胞快遞員進行細胞溝通所造成，而不是細胞原生的惡化或突變。舉例來說，在 1996 年，Raposo 等人的研究中發現，過去認為只會在免疫 B 細胞上形成的 major histocompatibility complex (MHC) II 複合體，透過顯微攝影發現複合體同樣能被包裹在 exosome 中，外吐到鄰近的上皮細胞，並且再度融合在一般上皮細胞上，使之短暫地扮演誘導 T 細胞活化的功能 2 。於下圖顯微鏡觀察可以清楚看見，黑色顆粒代表以奈米粒子標定 MHC II 的成像，緊貼於 exosome 表面攜帶 (粒徑尺寸約為 60-80 nm，遠比 B cell 小) .可以觀察到同樣標定 MHC II，黑點皆座落在體細胞膜並累積，有明顯轉移的現象。有了免疫學和癌症學的研究開啟新局，exosome 引起科學界廣泛的重視。後續研究中，Simpson 等人統整 exosome 能夠攜帶的特殊蛋白質，有些能夠一次性包裹多種蛋白至不同細胞來影響整體的細胞功能，特殊的多型性對於接受 exosome 的細胞來說，甚至比激素或細胞自身的調控影響還巨大 3 。在 2003 年的發表文獻中，第一次提供證據顯示 exosome 能夠包裹完整的 HIV 膜蛋白和表面抗原，形成

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