液態活檢 ( liquid biopsy ) 近年興起，已逐漸成為分子檢測主流趨勢。得力於 NGS 的高靈敏度 ( 0.3-1% VAF )，它可在不取得原位組織檢體下，藉由分析受測者血液樣本中的游離 DNA ( cell free DNA, cfDNA ) 獲得重點突變評估，提供了一個採檢友善、非侵入性的替代性篩查法。同時此技術的偵測力隨著 NGS 定序量增加而有提升空間，此類篩檢已逐步應用於臨床
1，用於如早期診斷、術後監控、用藥效力、追蹤預後等。
此研究所分析的 20 位個案，為 2011 – 2017 間於日本國立癌症中心醫院接受過質子治療 ( proton beam therapy, PBT ) 或立體定位放射治療 ( stereotactic body radiotherapy, SBRT ) 的 CRC 患者
( Tab 1 )，這些個案於 PBT 及 SBRT 治療前以 EDTA 管收了 14 mL 周邊血液，後經 1,600 × g、4°C 離心 10 分鐘取得 plasma，交由日本國家癌症研究中心生物庫 ( National Cancer Center Biobank ) 以 -80 度凍存。申請後取得 4 mL plasma 進行 cfDNA 抽取，獲得的 cfDNA 以 Agilent SureSelect NCC oncopanel v.2 建立文庫 ( Library Preparation ) 並以 illumina 系統進行 40-45Gbase / cfDNA 的定序，後使用 Agilent SureCall 分析 114 個重要致病基因突變。
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【Tab 1. Patient characteristics.】
The median age was 72 years (range=54-85 years). Twelve patients (60%) were male, and none had a performance status of ≥2. The metastatic lesions affected the lung (35%), liver (55%), and distant lymph nodes (10%). Thirteen patients (65%) had a single metastasis. Fifteen patients (75%) underwent PBT (relative biological effectiveness: 60-80 Gy/10-33 fractions) and 5 were (25%) treated with SBRT (35-48 Gy/4-5 fractions). |
2. 突變位點
20 位個案的 cfDNA 定序結果顯示，有 10 個基因在族群中具有一定的族群突變率 TP53 ( 45% )、APC ( 40% )、KRAS ( 15% )、PIK3CA ( 15% )、NF1 ( 5% )、BRCA1 ( 5% )、ERBB2 ( 5% )、FBXW7 ( 5% )、KIT ( 10% )、與 HRAS ( 10% )
( Fig 1 )。
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| 【Fig 1. Mutated genes in 20 plasma samples from patients with oligometastatic colorectal cancer.】 |
3. 預後追蹤
從 16 個能檢測到 cfDNA 突變的檢體中，具有 multi-clonal 突變者有較差的預後
( Fig 2a )。另外對於具有肺轉移的 7 個檢體進行分析，發現未偵測到 cfDNA / 突變者皆有較長、較理想的存活狀況
( Fig 2b )。
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【Fig 2. Progression-free survival curves.】
(a) Comparison of progression-free survival between patients with clonal versus multi-clonal oligometastatic colorectal cancer. (b) Comparison of progression-free survival depending on detectability of cfDNA among lung oligometastatic colorectal cancer. |
雖然先前已有 CRC 的 cfDNA 定序研究結果，但此研究為第一個 oligometastatic CRC 的 cfDNA 預後狀況分析。雖然沒有發現與存活率相關的特定突變位點，但透過 cfDNA 中的 multi-clonal mutation 存在性，還是能與預後有所關聯。另外也觀察到 cfDNA 的偵測率，與肺轉移的個案存活率相關。這個結果顯示液態活檢技術對於病程控管追蹤有正面助益，在技術更加成熟的未來，應能有效引導疾病治療對策，並及提昇病患生活品質。
【參考資料】1.
https://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMra17061742.
https://ar.iiarjournals.org/content/41/2/829
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